OBJETIVO: Contribuir com o conhecimento da interação entre macrófitas e macroinvertebrados aquáticos no reservatório da Itaipu, bem como a variação espacial e temporal deste tipo de interação. MÉTODOS: Foi feito um levantamento das espécies de macroinvertebrados associados às raízes de macrófitas aquáticas no lago de Itaipu, no período de novembro de 2016 e abril de 2017. Foram coletados dois indivíduos de cada espécie de planta em oito bancos de macrófitas às margens do Refúgio Biológico de Santa Helena. As plantas foram coletadas, armazenadas em sacos plásticos e suas raízes lavadas em laboratório para a retirada dos macroinvertebrados, os quais foram triados e identificados ao menor nível taxonômico possível. RESULTADOS: A rede de interação macrófitas-macroinvertebrados teve um baixo padrão aninhado nas duas coletas. Os macroinvertebrados interagiram em média com 2,52 espécies de plantas na Coleta 1 e 2,22 na Coleta 2. As espécies de plantas tiveram em média 20,16 táxons de macroinvertebrados associados às suas raízes na Coleta 1 e 26,75 na Coleta 2. A interação mais abundante foi estabelecida entre Mytilidae (Mollusca) e Eichhornia crassipes (Ponteriaceae), totalizando 89,79% das interações estabelecidas. CONCLUSÕES: Os resultados demonstram a variação sazonal na interação macrófitas-macroinvertebrados e a diversidade de relações estabelecidas.