Objetivou-se nesse estudo, mensurar qual é o melhor dia para realização da inoculação in ovo, com avaliação da taxa de eclosão, peso dos animais ao nascimento e peso do intestino. Foram incubados 120 ovos férteis de matrizes da linhagem Cobb Slow, com 40 semanas de idade mantidas sobre mesma dieta e condições ambientais. Em três tratamentos em datas de inoculação diferentes, sendo o T1 com a inoculação realizada no 16° dia incubação, o T2 foi no 17° e o T3 foi inoculado no18°. Para todos os tratamentos foram inoculado 0,5 ml de solução nutriente de glicose (sendo uma solução de 0,2 ml de glicose 50% dissolvido em 0,5 mL tampão PBS). Os dados obtidos foram submetidos á análise de variância e quando significativo, as médias foram comparadas pelo teste de Tukey a 5% de probabilidade, utilizando o programa Assistat®. Os resultados indicam que nos três dias de inoculação não, apresentou diferença sobre a taxa de eclosão, peso ao nascimento e peso dos intestinos, dessa forma, essa técnica pode ser utilizada em qualquer um desses dias testados.