A contaminação fúngica em alimentos têm grande importância na saúde humana e animal, pois a sua contaminação além de acarretar inúmeras perdas econômicas associadas à redução de nutrientes. Devido estas características há uma grande necessidade na redução de espécies fúngicas afim de reduzir seus potenciais risco, entretanto, os fungicidas sintéticos utilizados na prevenção do crescimento fúngico apresentam alta toxicidade. Neste sentido, o objetivo deste trabalho foi avaliar a atividade antifúngica do óleo essencial de Laurus nobilis Linnaeus frente ao Aspergillus flavus. Para isto, o óleo essencial foi extraído utilizando o aparato de Clevenger, a atividade antifúngica foi realizada através da determinação da concentração inibitória mínima e concentração fungicida mínima pela técnica de microdiluição. Os valores encontrados no presente estudo forma de 128 mg/mL e 256 mg/mL para a concentração inibitória mínima e concentração fungicida mínima, respectivamente. Estes resultados demonstram que o óleo essencial de Laurus nobilis não é eficaz na inibição de Aspergillus flavus a concentração encontrada é muito superior a concentração ideal relatada na literatura científica, entretanto, foi possível observar que a técnica utilizada é uma metodologia viável e sensível determinação da atividade antifúngica e apresenta como vantagem a utilização de pequenos volumes de meio de cultura e óleo essencial.