Objetivou-se no presente trabalho a identificação taxonômica das espécies de peixes ocorrentes na área de influência do Refúgio Biológico de Santa Helena, PR, Brasil, bem como a caracterização dos aspectos reprodutivos das espécies numericamente mais representativas. Foram realizadas duas coletas, sendo uma em nov. 2017 e a segunda em abr. 2018 nas seguintes localidades: o Lago de Itaipu, Refúgio Biológico de Santa Helena (RBSH) circundando a península, e o rio São Francisco Falso (RSFF).  Os peixes foram coletados utilizando-se de redes de espera, rede de arrasto e pesca de peneira. Os seguintes atributos ecológicos e índices reprodutivos foram calculados: relação gonadossomática e relação peso-comprimento. Foram capturados 1.102 indivíduos distribuídos em sete ordens, 24 famílias e 58 espécies. A ordem mais diversa foi Characiformes.  Dentre as capturas, 11 espécies são migradoras e as restantes sedentárias, 20 espécies são não nativas. Somente Parauchenipterus galeatus (Linnaeus, 1766) e Leporinus friderici (Bloch, 1794) tiveram valores significativos de RGS. A relação peso-comprimento de Serrasalmus maculatus Kner, 1858 mostrou crescimento do tipo alométrico positivo no RBSH e isométrico no RSFF, enquanto Serrasalmus marginatus Valenciennes, 1837 registrou somente crescimento alométrico negativo. Conclui-se, portanto, o registro de 58 espécies, e a contribuição para o melhor entendimento da biologia das espécies supracitadas.