O leite é importante fonte de nutrientes na alimentação humana, mas sua qualidade pode ser comprometida pela presença de compostos tóxicos. Embora o limite máximo de AFM₁ seja determinado para garantir a saúde dos consumidores, outras micotoxinas não são controladas e há informações limitadas sobre a ocorrência de micotoxinas nessa matriz. Por isso, um método de extração baseado no método QuEChERS foi validado para determinação de aflatoxinas B₁ (AFB₁), G₁ (AFG₁), G₂ (AFG₂) e M₁, ocratoxina (OTA) e zearalenona (ZEA) de forma simultânea em leite fluído por cromatografia líquida acoplado a um detector de fluorescência. As curvas analíticas apresentaram r² superior a 0,99, o LQ estabelecido pelo método foi: 0,16; 1,08; 0,01; 0,12; 0,33 e 8,93 μg/Kg para AFB₁, AFG_1, AFG_2, AFM₁, OTA e ZEA, respectivamente. As recuperações do método foram entre 73,33 e 114,32 %. O efeito matriz foi inferior a 20 %, com exceção para a AFB₁ em dois ensaios. O método foi eficiente para identificar e quantificar multimicotoxinas em leite fluído e pode ser aplicado como método de rotina para monitorar a qualidade do leite, objetivando oferecer produtos seguros para o consumo humano.