O objetivo de presente trabalho foi validar o cultivo de três espécies de cogumelos do gênero Pleurotus sp. em diversos tipos de substratos e em diversas concentrações, além de quantificar as massas dos corpos de frutificação no primeiro ciclo de cultivo para determinar a eficiência biológica e validar e avaliar o método de determinação do potencial antioxidante. Foi utilizado três linhagens de cogumelos, comumente chamado de shimeji-preto (SP), shimeji-branco (SB) e o Pleurotus djamor (PD). Foi feito seis testes de crescimento que tiveram como base de cepilho de Pinus elliottii suplementado com farelo de trigo; Bagaço da maçã; Milho em grão; Borra de café; Serragem, Extrato com Farelo de Trigo e Casca de Trigo Sarraceno; Serragem, suplemento com farelo de trigo, casca de trigo sarraceno e melhorador do pão da marca Fleishman. Para todos os testes foi completado com calcário de concha e gesso. Todos os testes foram submetidos a uma verificação da eficiência biológica, sendo que o substrato com base em Pinus elliottii foi encontrado com o melhor conteúdo biológico. Foi escolhido o substrato com base de Pinus elliottii e a cepa de shimeji-branco para analise de potencial antioxidante que em termos de IC50 foi de 0,109mg/mlDPPH.