A Valeriana officinalis L. é uma planta pertencente à família das Caprifoliaceae. Suas raízes e partes subterrâneas são as partes mais utilizadas para fins medicinais, empregada como sedativo leve ou moderado, bem como no tratamento de insônia associada a ansiedade. Este trabalho teve por objetivo avaliar a atividade antimicrobiana do extrato alcoólico de V. officinalis L. sobre bactérias de isolados clínicos, dada a constante necessidade do estudo de novas substâncias bioativas eficazes no tratamento de doenças infecciosas. Para isso, avaliou-se a Concentração Inibitória Mínima (CIM) e a Concentração Bactericida Mínima (CBM) do extrato vegetal através do método de microdiluição em caldo e “spot test”, respectivamente. As bactérias analisadas foram Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus, Escherichia coli e Clostridium perfringens. Os resultados demonstraram que o extrato de valeriana exerceu ação inibitória para todas as bactérias testadas, sendo que a bactéria P. aeruginosa demonstrou maior sensibilidade. Enquanto isso, o teste de CBM demonstrou que o extrato teve maior atividade bactericida para a E. coli com morte total bacteriana. Portanto, o extrato de valeriana pode ser uma alternativa de substância bioativa efetiva na atividade antibacteriana, necessitando de estudos mais aprofundados quanto ao seu uso.