O táxon polifilético Astyanax compreende espécies com formas semelhantes e taxonomia pouco detalhada. Este trabalho teve como objetivo caracterizar, por meio de metodologias citogenéticas clássicas (coloração convencional por Giemsa, bandamento C e impregnação por nitrato de prata – Ag-NORs) e realizar um mapeamento físico dos genes ribossomais 5S e 18S moleculares (Double FISH), através de exemplares de Astyanax laticeps oriundos de Esquina Céu Azul, Santa Helena, Paraná. O número diploide analisado foi de 50 cromossomos (8m+24sm+6st+12a, FN=88), igualmente distribuídos entre sexos. O Bandamento C demonstrou blocos de heterocromatina com marcação conspícua em poucos pares de cromossomos, com presença de heterocromatina localizada predominantemente na região terminal do braço longo em três cromossomos, correspondendo com as NORs. Foram observados cístrons simples de rDNA 5S conservados na região intersticial de um par cromossômico metacêntrico. As marcações por sonda de rDNA 18S revelaram cístrons constantes nas regiões terminais do braço curto de um par subtelocêntrico e uma terceira marcação em um único cromossomo, indicando ocorrência de sítios múltiplos para este marcador devido a possível deleção, transposição entre homológos ou crossing desigual. O estudo é prévio, porém fornece dados importantes na elucidação de questões de ordem taxonômica e evolutiva em Astyanax laticeps.