Última alteração: 2021-10-15
Resumo
O CRISPR-Cas9 é a ferramenta de edição genômica mais utilizada atualmente para modificações em células animais. A entrega para as células do material genético essencial para o uso da ferramenta segue sendo a prática mais laboriosa desta técnica, uma vez que se necessitam longas sequências de DNA. A expressão endógena da enzima Cas9 em animais geneticamente modificados é uma alternativa capaz de reduzir o material necessário para aplicação da ferramenta. Assim, este trabalho objetivou a seleção e manipulação in silico de sequências de DNA para estabelecimento de uma plataforma de edição gênica em células bovinas geneticamente modificadas baseada no sistema CRISPR-Cas9. O design da plataforma foi construído baseado na literatura, considerando potenciais efeitos prejudiciais às células bovinas. Os elementos necessários foram definidos e os plasmídeos contendo-os foram obtidos através de doações de laboratórios de pesquisa, sendo clonados e armazenados em linhagens específicas de E. coli. As sequências genômicas e mapas dos plasmídeos foram obtidas nos bancos de dados GenBank e AddGene. A análise dessas sequências foi realizada utilizando os softwares de biologia molecular SnapGene e Serial Cloner, definindo os primers necessários para construção do vetor molecular e do fragmento para recombinação homóloga da plataforma de edição gênica.