Este estudo objetivou contribuir com o conhecimento das interações entre macrófitas flutuantes e invertebrados aquáticos no reservatório de Itaipu, verificando a estrutura e variação temporal dessas interações. Levantamentos de invertebrados associados às raízes de macrófitas aquáticas no lago de Itaipu foram realizados nos meses de novembro de 2016, abril, junho e setembro de 2017. Em cada avaliação, foram coletados dois indivíduos de cada espécie de planta em 10 bancos de macrófitas às margens do Refúgio Biológico de Santa Helena, PR. As plantas coletadas foram armazenadas em sacos plásticos e suas raízes lavadas em laboratório para a retirada dos invertebrados, os quais foram triados e identificados. Foram coletados 72.535 invertebrados associados à 230 raízes de oito espécies de plantas. A rede de interação macrófitas-invertebrados teve baixos valores de aninhamento e de especialização. Os invertebrados interagiram em média com 2,7 espécies de plantas na Coleta 1, e 2,29 na Coleta 2, 3,09 na Coleta 3 e 3,7 na Coleta 4. As espécies de plantas tiveram em média 21,66 táxons de invertebrados associados às suas raízes na Coleta 1, 29,25 na Coleta 2, 23,42 na Coleta 3 e 32,85 na Coleta 4. A interação mais abundante foi estabelecida entre Mytilidae (Mollusca) e Eichhornia crassipes (Pontederiaceae) totalizando 33.433 indivíduos em 45 raízes. Este estudo demonstrou que a rede de interação macrófita-invertebrado aquático possui padrão generalista com variação temporal na estrutura interna das redes.