O gênero Cattleya, de ocorrência natural no Brasil, é destaque no mercado de plantas ornamentais um setor de grande retorno financeiro. Esta demando cria a necessidade de determinar um meio de cultura eficiente de propagação de plântulas in vitro de deste gênero para atender o mercado e evitar a extinção. O objetivo deste trabalho foi testar o meio Knudson suplementado com concentrações de vitaminas do meio MS no subcultivo da orquídea Cattleya Amethystoglossa. Os explantes utilizados foram plântulas oriundas de germinação in vitro, com comprimento aproximado 1,0 cm. O experimento foi realizado utilizando os concentração de 1,0 para o meio Knudson combinado com as concentrações de vitaminas do meio MS 0,0; 0,5 e 1,0. Os frascos de inoculação para o experimento continham 60 mL de meio preparado, foram inoculadas cinco plântulas, sob condições assépticas em câmara de fluxo laminar. Pode-se utilizar o meio Knudson suplementado na concentração 1,0 como a melhor composição de meio de cultura para o cultivo in vitro da no micropropagação in vitro promoveu o melhor desenvolvimento da orquídea Cattleya Amethystoglossa.