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Isolamento de RNA total de grãos de trigo
Última alteração: 2019-01-02
Resumo
O objetivo do presente trabalho foi o isolamento de RNA total de grãos de trigo. Com a finalidade de isolar o RNA para análise da expressão gênica em resposta a germinação em pré-colheita, foram selecionadas quatro cultivares contrastantes quanto à resistência a germinação pré-colheita, Frontana e Jadeite 11 (resistentes) e as cultivares Taurum e BRS 207 (suscetível). Primeiramente foi implantado um experimento em casa de vegetação em vasos na densidade de 350 plantas m², em delineamento experimental de blocos ao acaso com três repetições. Na maturidade fisiológica foi realizada a coleta e debulha das espigas, em laboratório, as sementes foram distribuídas em caixas de poliestireno transparente e mantidas a 24°C e 100% de umidade. Após 24 horas, foi realizada a coleta das sementes e realizada a extração do RNA total utilizando o reagente Purelink Plant RNA Reagent™ (Invitrogen). Posteriormente, as amostras foram quantificadas em espectrofotômetro e a integridade do RNA analisada em eletroforese em gel de agarose. A integridade do RNA extraído foi considerada adequada. A razão A260/A280 variou de 1.31 à 2.85, e a quantidade de RNA extraído variou de 170 ug mL -1 a 5000 ug mL-1. Assim obtendo boa relação na maioria das amostras. O reagente aqui utilizado permite uma boa integridade e quantidade de RNA isolados de grãos de trigo, desta forma, o estudo poderá prosseguir, de modo a analisar a expressão de genes nos referidos tecidos.
Palavras-chave
Germinação pré-colheita. Triticum aestivum L.. Integridade