Devido a importância da cultura de tecidos em obter mudas saudáveis para o seu cultivo e sabendo que a mandioquinha-salsa (Arracacia xanthorriza), pode ser uma excelente alternativa de renda para pequenos e médios agricultores, principalmente da agricultura familiar, o objetivo deste trabalho foi avaliar a eficiência de diferentes fotoperíodos no desenvolvimento de duas cultivares de mandioquinha-salsa, sob o cultivo in vitro. O experimento foi conduzido no laboratório de Cultura de Tecidos, no Departamento Acadêmico de Ciência Agrárias, da Universidade Tecnológica Federal do Paraná, campus Pato Branco, utilizou-se as cultivares BRS Rubia 41 e BRS Catarina 64, desenvolvidas pela Embrapa. A Cultivar BRS Rúbia, apresentou melhores resultados no fotoperíodo 12, quanto ao desenvolvimento de brotos, folhas e raízes, demonstrando também menor presença de fungos, calo, hiperhidricidade e ausência de bactérias para este fotoperíodo. Para cultivar BRS Catarina 64, o melhor desenvolvimento dos explantes, em relação ao número de folhas e raízes foi no fotoperíodo 14, porém no fotoperíodo 10, foi menor a presença de fungos, bactérias, calo e hiperidricidade.